Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 61

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 55 56 57 58 59 60 < 61 > 62 63 64 65 66 67 .. 185 >> Следующая

5„7„4„ Денатурация DNA
В качестве заключительного примера использования метода поляризации приведен температурный график Перрена для комплекса профдавин -DNA [24] (рис. 5.16). Профлавин встраивается между парами оснований двойной спирали DNA. При такой локализации его вращательное движение строго ограничено. Наблюдаемое значение поляризации —0,36 при Р0 = 0,47 4 показывает, что профлавин практически неподвижен, когда он связан с DNA. Наиболее отличительной чертой этих данных является резкое увеличение 1 /Р - 1/3, наблюдаемое при 60 °С, которое вызвано термической денатурацией DNA, сопровождающейся высвобождением связанного профлавин а.
Задачи
5-1- 'Используйте данные рис„ 5.15 для вычисления эффективного объема IgG при Ю, 20, 35 и 45 °С и угла, в пределах которого дансильная метка свободно вращается (дополнительно к общему вращению белка) в течение времени жизни возбужденного состояния. Примите для IgG т = 10 не и плотность 1,2 г/сми. Считайте также,
что флуорофор не имеет внутренней подвижности при 10 °С„ Сравните вычисленный объем с тем, который следует ожидать для сферической молекулы с молекулярной массой 150 ООО..
5-2„ Пусть зонд 1-диметиламино-5-нафталинсульфокислота (DNS ) связывается с бычьим сывороточным альбумином (BSA).
а) В предположении, что связывание не влияет на квантовый выход зонда, используя следующие данные, вычислите константу диссоциации ^’дисс комплекса DNS -BSA по формуле .. [ DN5][ HSA]
дисс [ DNS _ ВЯА]
(5.63)
[DNS] Р
10“7 м 0,0149
10~7 м 0,2727
1СГ7 М 0,3913
б) Теперь предположим» что квантовый выход DNS увеличивается в два раза при связывании с BSA. Чему равна КдИСС в этом случае?
в) Как вы определите, изменяется ли квантовый выход DNS при связывании с BSA?
г) Предскажите кинетику затухания анизотропии для каждого из указанных растворов при 20 °С;
[ USA]
О 1
2 • 1О"6 М 1
-\> К 1
дисс 1
Примите р 0,3913 для DNkS, Считайте, что время вращательной корреляции DNS и В.ЧА хорошо аппроксимируется временами, предсказываемыми для безводной сферы. Молекулярная масса BSA составляет 64000. Используйте вязкость и ппот-ность из задачи 5-3.
5-& Предпопожим, что есть три белка — рибонуклеаза, химотрипсин и -ргло-бупин и нужно количественно оценить их химическую сшивку в димеры, для чего можно использовать три зонда: флуоресцвинизотиоцианат, дансипхлорид и ангидрид пиренмаспяной кислоты. Молекулярные массы рибонуклеазы, химотрипсина и углобулина равны 12 642, 22 600 и 150 ООО соответственно. Вычислите уменьшение анизотропии вспедствие вращательной диффузии и влияние димеризации на наблюдаемые значения анизотропии. Подберите зонды для белков, так чтобы получить максимальную чувствительность анизотропии к димеризации и объясните причину выбора. В вычислениях примите,что время вращательной корреляции увеличивается при гидратации на 50% по сравнению с безводной сферой» Вязкость воды при 25°С 0,894 сП (г ¦ см"1 • с"1). Плотность белков может быть принята равной 1,2 г/сма, Времена затухания флуоресценции белков, меченных флуоресцеином, дансилом и пиренбутиратом равны 4, 10 и 100 не соответственно. Примите для этих же зондов, что г0 равно 0,38, 0,30 и 0,15 соответственно.
5-4. Используйте данные табл. 5.3 для решения следующих задач о комплексе пумазинового белка с пумазином,
а),Вычислите константу диссоциации пумазин-бепкового комплекса при 4 °С. Примите Я ¦= <?СВЯЗЛ/СВС|6 = 1*5 и испопьзуйте данные для 0,09 мкМ.
б) Значение PQ для лумазина равно 0,45. Вычислите время вращательной кор-репяции пумазинового белка при 4 °С. Время затухания флуоресценции несвязанного пумазина равно 12,3 не.
II- 413
в) Предскажите кинетику затухания анизотропии флуоресценции для раствора с концентрацией 0,09 мкМ при 4 °С. Примите, что время затухания < 1 не не может наблюдаться на имеющемся приборе.
5-5» Предположим, что флуорофор имеет одно и то же время жизни т в двух разных окружениях, но разные времена вращательной корреляции, т.е.
г(0-го(/1е“ '/ф1 +/2е~'/ф2) (5.64)
где - доля флуоресценции, соответствующая флуорофорам в окружении 1. Естественно, + /2 = 1. Выведите уравнение, которое связывает стационарную анизотропию с долями интенсивности /,• и корреляционными временами <р,- индивидуальных форм. Покажите, что это уравнение упрощается до уравнения Перрена при 1.
ГЛАВАб.
Кинетика затухания анизотропии флуоресценции
В предыдущей главе были рассмотрены измерение и интерпретация данных по стационарной анизотропии флуоресценции, полученных при непрерывном освещении. Интерпретация этих значений основывается на уверенности в правильности предполагаемого кинетического закона затухания анизотропии [ f (г) ] р— закона, который не наблюдается непосредственно в эксперименте. Это иллюстрируется уравнениями (5.40) - (5.44), в которых уравнение Пер-рена выведено на основе предположения, что r(t) затухает до нуля как одноэкспоненциальная функция. Значительная дополнительная информация может быть получена при анализе кинетики затухания анизотропии флуоресценции. Кинетику затухания можно измерять вслед за импульсным возбуждением, и r(t) выводится с помощью тех же методов, которые использовались при измерении времен затухания флуоресценции (гл. 3). Вид г(г) может быть проверен косвенно путем измерения фазового сдвига между параллельными и перпендикулярными составляющими испускания. Вид r(t) можно также оценить и при определении стационарной анизотропии, используя тушение при столкновениях.
Предыдущая << 1 .. 55 56 57 58 59 60 < 61 > 62 63 64 65 66 67 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама