Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 67

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 185 >> Следующая

Можно использовать фактор / для того, чтобы вычислить угловое смещение, определяющее'короткие движения. Рассмотрим уравнение (6.15). Очевидно, что фактор f описывает анизотропию, остающуюся после завершения быстрых движений. Используя уравнение (5.45), можно получить выражение
Zf + 1
cos2y=_J^!-------- (6-24)
Случай /-дол = 0 соответствует быстрому движению с неограниченным углом (cos2y = 1/3 или у = 54,7°); fROn = 1 соответствует случаю, когда быстрое движение не дает вклада в потерю анизотропии (cos 2у = 1 или у = 0°). Для IgG f ~ 0,56. Эти результаты были интерпретированы как быстрое вращение Fab-области IgG на угол 33°. Следовательно, сегментальные движения /^-области существенны. Для точности отметим, что с помощью угла у интерпретируется регистрируемый параметр /дол. В действительности в экспериментах по анизотропии измеряют не углы, а среднее значение cos2 0[ уравнения (5.15) - (5.19)]. Переведение наблюдаемого параметра cos2 0 в 0 делается для наглядности измеряемых величин. '
12-413
Анизотропий испустния
Время, мс
РИС. 6.8. Графическое представление кинетики затухания анизотропии флуоресценции дансип-лизина, связанного с IgG и его фрагментами [19].
fl™ Fab \> * °'32 - 33 но,. ДЛЯ I6G/Kop = 0,44, /д0„ - 0,56 , ^ = 33 НС и
Ч*дол“168 не.
6.2.3. Деполяризация Y-йснования в дрожжевой tRNA фенилаланина (tRNAP*1*5). ¦
Как правило, нуклеиновые кислоты не проявляют заметной флуоресценции. Однако tRNAPhe из дрожжей имеет необычное сильно флуоресцирующее основание, названное Y-основанием. По кинетикам затухания анизотропии флуоресценции было изучено влияние Mg2+ на вращательную диффузию tRNA. Результаты показывают, что Y-основание подвижнее, чем предполагалось для сферы равного объема. Следовательно, можно считать, что Y-основание вращается независимо от молекулы tRNA в целом [21].
На рис. 6.9 приведено затухание /ц («) - которое происходит как
в результате вращательной диффузии, так и в результате затухания флуорес центного испускания:
где h - условная константа пропорциональности. Кажущееся время затухания О(г), равное 3,8 не, определяется выражением
Общая флуоресценция (/|( +• 2 IjJ затухает с одним временем т ~ 6,2 не, и, следовательно, ф - 9,8 не. Это значение может быть сопоставлено со значением, предполагаемым для молекулы с такой ж? молекулярной массой, как tRNA(26400), если использовать соотношение <р = x]V/RT. При rj = 0,89 сП [г/(см-с)]
(6.25)
1/т* ~ 1 /ф +¦ 1/т
(6.26)
юоооо
Экспериментальные 1И~11
Наилучшая теоретическая аднознспоненциаль мая придал
ГО I_______________________________1__________________1___________________L
20 40 60 80 ЮО 1ZO
Номер канала
1 не = 2,11 канала.
и плотности 1 г/см3 получаем ф = 9,5 не для безводной сферы. Молекула tRNA не является сферической, и, таким образом, следует ожидать большего значения ф. Более того, гидратация будет приводить к увеличению значения ф. Реальное время вращательной корреляции, по-видимому, ~18 не, и для tRNA, маркированной этидийбромидом, из затухания анизотропии было получено время корреляции, равное 25 не. Следовательно, наблюдаемое значение 10 не, вероятно, указывает на сегментальную подвижность Y-основа-ния.
Интересно отметить, что в этом случае многоэкспоненциального затухания r{t) не наблюдалось. Конечно, перепроверка r(t) может показать, так ли это. Важно то, что можно сравнить кажущиеся времена корреляции с вычисленными по уравнению Стокса - Эйнштейна [уравнение (5.40)]. Измеренные значения, которые меньше, чем вычисленные времена корреляции, по-видимому, указывают на сегментальную подвижность. При подобном грубом сравнении степень подвижности и ее время корреляции не определяются. Тем не менее можно получить общую оценку гибкости биополимера.
б.З. Разностная поляризационно-фазовая фпуорометрня
Разностная поляризационно-фазовая флуорометрия (РПФ) представляет собой один из методов изучения кинетик затухания анизотропии. В этом методе образцы возбуждают поляризованным синусоидально-модулированным светом и измеряют разность фаз (А = фх — фц ) между перпендикулярной и параллельной компонентами испускания. Эта разность фаз зависит от rQ, частоты модуляции, скорости вращения флуорофора, свободы и изотропности вращений. Следовательно, можно получить информацию о виде г(«). Как и в случае измерения времен затухания флуоресценции фазовым методом (гл.З), получают косвенную информацию, особенно когда измерения проводят с использованием одной частоты модуляции. И тем не менее, в этих измерениях содержится ценная информация об анизотропии [ 22, 23] и затрудненности вращений [ 24] и могут быть измерены скорости быстрых вращений [ 25]..
6.3.1. Измерение разностных фазовых углов
Блок-схема разностного фазового флуорометра приведена на рис. 6.10. Модулированное возбуждение поляризовано вертикально. Как правило, испускание регистрируется одновременно двумя детекторами [ 23], поэтому измерения называют разностными*. Испускание в обоих каналах наблюдается через поляризаторы. Фазовый угол между параллельной и .перпендикулярной составляющими измеряется следующим способом. Во-первых, измеряют раэ-
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама