Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 8

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 185 >> Следующая

р_ f'l.T—— (1.6), (1.7)
/п 4-2/jl ^li + (l
гдо /ц и /jl - интенсивности флуоресценции вертикально (II) и горизонтально (1) поляризованного испускания в случае возбуждения образца вертикально поляризованным светом. Анизотропия и поляризация - это выражения одного и того же явления, поэтому их можно взаимозаменять, используя уравнения (5.3) и (5.4). Некоторые факторы могут уменьшать измеряемую величину анизотропии до значений ниже максимального. Самым распространенный из них - вращательная диффузия, которая происходит за время жизни возбужденного состояния и смещает испускающий диполь флуорофора. Измерение этого параметра дает информацию об относительном угловом смещении флуорофора в интервале между поглощением и испусканием. Перенос энергии возбуждения между флуорофорами также приводит к уменьшению анизотропии.
Предположим, что единственным существенным процессом, приводящим к уменьшению анизотропии, является вращательная диффузия. Тогда изме-
дом), присутствующими даже в ничтожных концентрациях « 10“5 М), времена жизни триплетных состояний обычно составляют 10~6 — 10-4 с. Поэтому квантовые выходы фосфоресценции в жидких растворах обычно меньше 10*"3,. При очень тщательной очистке растворителей удается наблюдать фосфоресценцию и в жидких растворах, например кетонов в еоде. Для некоторых соединений (например, диацетила), имеющих повышенные константы скорости испускания фосфоресценции и малые константы скорости тушения триплетных состояний кислородом, наблюдается фосфоресценция и в жидких растворах в обычных условиях. — Прим. ред.
ряемая анизотропия определится выражением г0
г ^ _____ _____ (1.8)
1 + (т/ <р)
гдег0 - анизотропия, которая должна была бы измеряться в отсутствие вращательной диффузии, а ф — время корреляции для процесса диффузии, определяемое как
9=--г\V/kT 0‘9)
где г| — вязкость раствора; к — константа Больцмана; Т - абсолютная температура; У - объем вращающегося фрагмента. Рассмотрим белок с молекулярной массой 50 ООО, Поскольку удельный объем белков (.-оставляет ^0,73мл/г, можно легко подсчитать, что при 25° С в водном растворе (т] = 0,00894 П) ожидаемое время корреляции составляет 13 не для безводной сферы. Поскольку белки гидратированы, фактическое время корреляции, по-видимому, должно быть больше. Однако существенным является то, что времена вращательной корреляции для большинства белков сравнимы с типичными временами затухания флуоресценции. Поэтому результаты измерения анизотропии флуоресценции зависят от всех факторов, влияющих на скорость вращательной диффузии. По этой причине измерения поляризации флуоресценции широко используют для изучения гидродинамических свойств макромолекул.
1.S. Временная шкапа молекулярных процессов в растворе
Флуоресцентная спектроскопия - эффективный метод исследования динамических процессов в растворах, представляющих интерес для биологов. Такая возможность связана в первую очередь с временем жизни возбужденных состояний. Вследствие принципа Франка - Кондона абсорбционная спектроскопия может дать информацию только об усредненных характеристиках основного состояния молекул, поглощающих свет. Поскольку только те молекулы растворителя, которые непосредственно соседствуют с поглощающими частицами, будут влиять на их спектр поглощения, абсорбционная спектроскопия может дать информацию лишь о некоторой средней сольватной оболочке растворителя, соседствующей с хромофором, и не отражает молекулярную динамику. •
В противоположность этому параметры флуоресцентной спектроскопии являются чувствительными функциями всех процессов, протекающих за время жизни возбужденного состояния, причем в этих процессах могут участвовать молекулы, находящиеся в момент возбуждения на расстояниях до 100 А от флуорофора. Хотя может показаться, что 10 ис - слишком короткий промежуток времени, фактически это большое время по сравнению с вре-
менем движения малых молекул в жидком растворе. Вращательная диффузия связанных с белками и мембранами флуорофоров также укладывается в этот временной диапазон.
Тушеиие флуоресценции молекулярным кислородом по механизму столкновений является показательным примером размеров пространственного и временного диапазонов, представляемых временем затухания флуоресценции. Если флуорофор, находящийся в возбужденном состоянии, сталкивается с молекулой кислорода, он возвращается в основное состояние без испускания фотона. Коэффициент диффузии кислорода в воде при 25°С равен 2,5 • 10~5 см2/с. Среднее расстояние [ (Дя2)н3» на которое может диффундировать молекула кислорода за 10-® с, определяется уравнением'Эйнштейна:
Дх2 = 2Dt (1.10)
о
Расстояние [(Дя2)1'*] составляет ~ 70 А, что сравнимо с толщиной биологической мембраны или диаметром белка. Для некоторых флуорофоров времена жизни достигают 400 не, поэтому ^ожно наблюдать диффузию молекул кислорода на расстояния свыше 450 А* Напротив, измерения поглощения дают сведения лишь о непосредственном окружении флуорофора и, следовательно, о мгновенном усредненном окружении.
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама