Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 92

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 86 87 88 89 90 91 < 92 > 93 94 95 96 97 98 .. 185 >> Следующая

11 пс. Таким образом, видно, что с помощью спектров, полученных изменением времени затухания, можно получить информацию о процессах релаксации в субнаносекундном временном диапазоне. Такую быструю релаксацию обычно нельзя наблюдать, исследуя кинетику затухания флуоресценции, в первую очередь потому, что возбуждающая вспышка имеет конечную длительность (обычно 2 не), а также из-за временного разрешения фотоумножителей.
8.6. Анализ релаксации растворителя методом фазочувствительной
регистрации флуоресценции
В качество последнего метода исследования релаксации растворителя мы опишем использование (^нечувствительной регистрации флуоресценции (ФЧРФ) (гл. 4). В настоящее время появилось лишь несколько таких исследований, а применение ФЧРФ для изучения процесса релаксации растворителя еще только начинается. Для иллюстрации применения метода мы приводим данные для Ч-ацетил-ь-триптофаинмнда в пропиленгликолс [61. ')та система была выбрана как модель флуоресценции триптофана в белках. На рис. 8.2 были показаны спектры стационарной флуоресценции NATA. При высоких температурах (40 °С) максимум испускания находится при 350 нм. При понижении температуры максимум испускания сдвигается в сторону более коротких длин воли, и при -68 °С оп находится при 325 нм. При промужуточпых температурах (-30 °С) спектр также занимает промежуточное положение с максимумом при 336 нм. Низко- и высокотемпературные спектры можно рассматривать как принадлежащие F- и /^-состояниям соответственно. Анализ спектров, приведенных на рис. 8.2, показывает, что "перелаксировшшое" испускание преобладает в спектре с максимумом при 310 им, а "релаксированное" - при 410нм.
Напомним, что с помощью метода ФЧРФ можно подавить флуоресценцию с любым фазовым углом (гл. 4). В рассматриваемом случае метод фазочувст-вительпой регистрации флуоресценции использовали, чтобы раздельно подавлять флуоресценцию при 310 и при 410 нм. Из зависимости стационарных спектров от температуры было показано, что испускание на отих длинах волн соответствует неролаксированиому и релаксированпому состояниям. Подавления испускания добивались, подбирая фазовый угол детектора так, чтобы он отличался на 90° от фазы испускания.
Фазочувствительиые спектры NATA в пропиленгликолс приведены на рис. 8.16. При-68 °С подавление фазы либо для 310 нм, либо для 410 нм приводит к полному подавлению испускания. ')то связано с тем, что при -68 "С испускание происходит только из нерелаксировапного состояния, а время жизни этого состояния не 'зависит от длины волны. При повышении температуры подавление фазы для 310 и 410 нм приводит к появлению фазочувствитель-ных спектров с максимумами испускания вблизи 350 и 330 нм соответственно. Относительная интенсивность коротковолновой компоненты преобладает при более низких, температурах, а длинноволновой - при более высоких температурах (рис. 8.16). ')ти фазочувствительные спектры авторы приписали испусканию из перелаксированпых и ролаксированных сольватов молекул NATA . При более высоких температурах подавление фазы либо для 310, либо для 410 нм опять приводит к полному исчезновению спектра испускания. При высоких температурах растворитель релаксирует практически полностью и испускание в первую очередь происходит из релаксироваппого состояния, время жизни которого также пе зависит от длины волны.
Заслуживает упоминания высокое значение отношения сигнал/шум в фа-зочувствитольных спектрах. Такая чувствительность хорошо иллюстрирует-
ся разрешением, полученным при 20 °С, т-е. при той температуре, когда релаксация почти полная. Тем не менее спектральную компоненту, соответствующую нерелаксированному состоянию, все еще можно увидеть. Следовательно, этот способ, вероятно, будет полезен при изучении релаксационных процессов в биологических макромолекулах.
Длина волны, нм
РИС. 8.16. Фазочувствительные спектры флуоресценции Г*»ацетил-Ь-триптофан-амида в пропиленгликоле [б].
При каждой температуре интенсивность совпадающей по фазе флуоресценции при 360 нм нормирована к единице. Длины волн, выбранные для подавления фазы, показаны стрелками на рис, 8.2. (С разрешения American Society for Photobiology.)
8.7. Анализ спектральной релаксации в модельных
мембранах и белках
Поглощение света флуорофором приводит к мгновенному изменению электронной плотности и Дипольного момента. Если флуорофор присоединен к белку или мембране, макромолекула подвергается небольшим, но заметным возмущениям. Поело возбуждения может происходить релаксация макромолекулы вокруг возросшего дипольного момента возбужденного флуорофора. Динамические свойства макромолекулы тесно связаны со скоростью спектральной релаксации, которая отражает способность макромолекулы реагировать на мгновенное возмущение. Флуорофор может быть частично погружен в растворитель, и поэтому свойства поверхности раздела макромолекула - растворитель также могут оказывать влияние на скорости спектральной релаксации. В следующих разделах мы обсудим примеры зависящих от времени спектральных сдвигов, которые наблюдались дли флуорофоров, связанных с белками или мембранами. В настоящее время в литературе имеется относительно немного сообщений на эту тому, причем большинство зависящих от времени спектральных сдвигов было измерено для флуорофоров, связанных с мембранами. Для .оценки времен спектральной релаксации использовались все описанные ранее методы: импульсный и фазово-модуляционный, а также метод изменения времени затухания флуоресценции и фазочувствительный.
Предыдущая << 1 .. 86 87 88 89 90 91 < 92 > 93 94 95 96 97 98 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама