Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Зеймаль Э.В. -> "Мускариновые холинорецепторы" -> 24

Мускариновые холинорецепторы - Зеймаль Э.В.

Зеймаль Э.В., Шелковников С.А. Мускариновые холинорецепторы — Л.: Наука, 1989. — 289 c.
ISBN 5-02-025768-0
Скачать (прямая ссылка): muskarinovieholinoreceptori1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 108 >> Следующая


Для оценки неспецифического связывания опыт проводят в присутствии немеченого пиганда (того же самого, что меченый, или другого) (рис. 13). Чтобы оценить неспецифическое связывание, инкубацию ткани с меченым лигандом проводили в присутствии атропина в очень высокой концентрации - на 3 порядка

63 На А; по оси абсцисс - концентрация [Зн] ХНБ в среде (пМ) по оси ординат - [3Hj ХНБ, связавшийся в ткани (фмоли/мг ткани); ^ - обшее связывание; 2 - неспецифическое связывание (в присутствии 1 мкМ атропина); 3 - специфическое связывание [3Hj ХНБ с M-XP (разность между обшим и неспецифическим связыванием).

На Б - график Скетчарца, построенный по данным рис. 13, А По оси абсцисс - специфическое связывание [Зн]ХНБ (фмопи/мг) по оси ординат - отношение связанного [3Н]ХНБ (B)-K концентрации свободного 'pH] ХНБ (F) в среде(^МСіПи^г ткани ) ,

Согласно уравнению (8), наклон прямой равен 1/К (К =206 пМ) а отрезок на оси абсцисс - Вмакс (вмакс=163 фмоля/мг ткани).

большей, чем К атропина (рис, 13, А). В такой концентрации атропин оккупирует практически все рецепторы, препятствует специфическому связыванию ^3Hj ХНБ и остается только неспецифическое. Если вычесть его из общего связывания, получается насыщаемая кривая специфического связывания (рис,13, А). Можно видеть, что при концентрациях [3Н]ХНБ, близких к Ka

64 или еше меньших, специфическое связывание в несколько раз превышает неспецифическое (рис. 13, А). По мере того как специфическое связывание насыщается его доля в обшем связывании все больше уменьшается.

3.1.2, Прямые исследования связывания

Для а на низа специфического связывания меченых веществ с рецепторами применяют как прямые, так и непрямые методы. Прямые исследования проводят либо в условиях равновесия, определяя зависимость связывания от концентрации меченого ли-ганда, пибо кинетически, изучая, как протекает связывание во времени до наступления равновесия к как происходит уменьшение количества связанного лиганда при отмывании, Непрямые методы основаны на конкуренции немеченого лиганда с меченым за общие рецепторные участки связывания.

Зависимость связывания от концентрации лиганда в условиях равновесия. Опыт состоит в определении количества специфически связывающегося меченого лиганда при разных концентрациях его в среде (получение кривых насыщения в условиях равновесия). Для анализа кривых насыщения используют графики Скет-чарда и Хилла (см.: Yamamura et al., 1978; Weiland, Molinoff, 1981 ). Оба эти графика представляют собой преобразование данных, полученных в опытах, когда количество связывающегося вещества определяется как функция концентрации свободного вещества (рис. 13, Б).

Рассмотрим простейшие условия, когда все рецепторы однородны и не взаимодействуют между собой; когда одна молекула вещества соединяется с одним рецептором, а вещество присутствует в избытке, так что его концентрация во время связывания практически не меняется. В реакции (I) скорость

образования комплекса ^APj пропорциональна концентрации добавленного меченого лиганда /Aj и концентрации свободных рецепторов, которая равна разности между обшей концентрацией рецепторов fPolи концентрацией рецепторов, образовавших комплекс [APj. Тогда J

т>л-\[АШРЇ0-ІАР1), (2)

где к\ - константа скорости связывания вещества с рецептором. Скорость диссоциации комплекса ?APJ пропорциональна его концентрации:

!Ц-ЯЦГЛР] . (3)

где ]<_і - константа скорости распада комплекса.

Вначале, когда концентрация свободных рецепторов (CPJ0-- ?/4Р] ) велика, связывание молекул вещества с рецепторами идет гораздо быстрее, чем диссоциация комплекса. По мере

5 Заказ 861

65 того как все большее число рецепторов связывается с веществом, скорость прямой реакции замедляется, а скорость обратной - увеличивается, пока оки не станут равны (i>i=u_j). Следовательно

hw <гр1о -iapv-k1zapi (4)

Отсюда при равновесии

Kl тар\ -мр]) (5)

Jr1 = CJPJ к 1

Учитывая, что -=-=1-= -гт~ Kn (где Kr, - равновесная константа

Kj Kc Д с

сродства, а Кд - равновесная константа диссоциации), уравнение (5) может быть преобразовано в уравнение Скетчарда:

MPJ , ГР]0

Чтобы построить график Скетчарда, определяют зависимость специфического связывания пиганда (образования комплекса M Р] с меченым лигандом) от его концентрации в среде и получают кривую насыщения (рис. 13, А), Из этой кривой находят отношение для каждой данной концентрация пнган-

да в среде. Затем, в соответствии с уравнением Скетчарда (6), наносят по оси ординат отношение концентрации связанного вещества к концентрации свободного - [АР~\/ LA] (ее обозначают также В/F - Bound/Free ), а по оси абсцисс-концентрацию связанного вещества MP], которую обозначают как В (Bound ) (dhc. 13, Б).

Из накиона графика Скетчарда можно теперь найти

н [Р]

Кд, а из отрезка, отсекаемого прямой па оси абсиИсс ( общую концентрацию рецепторов в ткани

CPL.

ипи 0MaKC1

(рис. 13). [ Pi выражают обычно в фемтомопях (IOr1ff молей) или1 пикомолях (10 молей) на мг бепка.

Если с одной молекулой рецептора связывается п молекул пиганда
Предыдущая << 1 .. 18 19 20 21 22 23 < 24 > 25 26 27 28 29 30 .. 108 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама