Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Зеймаль Э.В. -> "Мускариновые холинорецепторы" -> 25

Мускариновые холинорецепторы - Зеймаль Э.В.

Зеймаль Э.В., Шелковников С.А. Мускариновые холинорецепторы — Л.: Наука, 1989. — 289 c.
ISBN 5-02-025768-0
Скачать (прямая ссылка): muskarinovieholinoreceptori1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 108 >> Следующая


Ii

TbA^ PyJ- An P , (Ia)

™ ^ = -[AnP] ). (2а)

В этом случае при равновесии

86 Г Л]П([Р]0 AArlPl) =^tAnP]. (4a)

Отсюда

[HrvP] Г/Пп г AtiP] С Al

CPio-IJnPi ' ^0-CAnPi

(46)

Логарифмирование правой и левой частей уравнения (4б) дает уравнение Хилла:

H-Wi-"WMI-IoarX.. (7)

График, соответствующий уравнению (7), строят для определения величины п - коэффициента Хилла. Общую концентрацию рецепторов ^Plo определяют из Графика Скетчарда, По оси

абсцисс откладывают год [Л], а по оси ординат fpj^lff ру

Наклон прямой равен коэффициенту Хипла, а из отрезка на оси абсцисс может бьіть получена величина К (рис. 14).

График Скетчарда и График Хилпа строятся из одних и тех же экспериментальных данных. Линейный график Скетчарда дает коэффициент Хилла, равный 1, а коэффициент Хилла, равный 1, дает линейный график Скетчарда.

Кинетические исследования. Исследование кинетики ассоциации вещества с рецептором и диссоциации комплекса дает более строгую и точную информацию о взаимодействии вещества с рецептором, чем кривые насыщения при равновесии. Определение констант скоростей обратной и прямой реакций позволяет

найти Ka как отношение этих констант: Кд= ¦¦. Если Ka,

1

полученная таким путем, отличается от Ka. найденной из графиков Скетчарда или Хилпа, то связывание не может быть описано простой бимолекулярной реакцией (1) даже в том случае, если график Скетчарда линеен и коэффициент Хилла равен 1. Для этого нужен более детальный кинетический анализ ( Weiland, Molinoff, 1981).

Константу скорости образования AP (к^ определяют для обратимой реакции второго порядка (1) согласно уравнению

[A Pl0

, ПА- CP]0 глы f J nWUPV UP]t) --^(Ml (8)

где LAPlj.- молярная концентрация комплекса лиганда с рецептором в момент времени t , а [Ар} - при равновесии;

начальная молярная концентрация свободных рецепторов, [/5] - молярная концентрация лиганда (см.: Weiland, Molinoff, 1981).

67 Pkс. 14, Графическое определение коэффициента Хиппа дпя специфического связывания C3H] антагонистов с си-налтооомами мозга крьюы, (По: Hulme et al., 1978) .

На А - зависимость связывания L Hj метипатропина (квадраты), ? 3H] атропина (треугольники) и|_ HjnBX (кружки) от концентрации. По оси абсиисс - логарифмы концентраций антагониста в среде (M); по оси ординат - специфическое связывание (% от максимального). На Б - графики Хилла, построенные по данным рис. 14, А, По оси абсцисс - логарифмы концентраций антагониста в среде (M); по оси ординат - логарифмы отношения занятых рецепторов к свободным: MPJ/

[Pj0-MPj.

Чтобы высчитать певую половину уравнения (8), для каждого данного момента времени t в эксперименте определяют количество связанного пиганда [АР}±через разное время от начала реакции и при равновесии M Р] и измеряют концентрацию пиганда Ml" Концентрацию участков связывания MJ0 определяют с помощью графика Скетчарда, Если нанести левую половину уравнения (8) по оси ординат, а по оси абсцисс -время, то в том случае, есгш реакция соответствует уравнению (1), получается прямая пиния (рис. IS1 А), Наклон прямой, разделенный на выражение в скобках в правой части уравнения (8), дает константу скорости второго порядка

Если концентрация лиганда [AJ существенно больше, чем концентрация рецепторов - [Р] ( M J^CPJob условия псевдопервого порядка, то большая часть пиганда остается свободной

[/4 PJt [/I PJ

даже при равновесии (Mla> M Pl р) • Поэтому Ml^—ртг;--

[/IJ LpJO

и—=-;—=—^ » MpIp. Тогда уравнение (8) упрощается до M P J р

к С'ЗСРЗо..^ (9)

Mpjp- C/lp]t . 1 MPJp

88 Рис. 15, Кинетика взаимодействия L3Hj ПЗ с M-XP головного мозга крысы. (По: buthin, Wolfe1 1984а).

На А; по оси абсцисс - время (мин); по оси ординат - левая часть уравнения (8). Согласно уравнению (8), k\ равна накпону прямой, деленному на Г Al [ Р]0/[/1 Р] р - Г/1 Р]. На Б: по оси абсцисс - время (мин) от момента добавления 1 мкМ атропина. По оси ординат - связанней [^н] ПЗ (число импульсов / мин* IO3). На вставке: по оси абсцисс - время (мин) от момента добавления 1 мкМ атропина; по оси ординат — -Ln[/4P]^f [/IP] ; согласно уравнению (И), наклон прямой равен

или, что то же,

МРУЫРЗ«, ^Jt ZAUPJО .tm (9а)

LAPlp 1 ZAPlp

Нанося по оси абсцисс время, а по оси ординат - левую часть уравнения (9а), получают график, наклон которого представляет

собой кажущуюся константу скорости первого порядка - кнабП-= , (10)

" набл. N [APlp '

Можно видеть, что ^набл, в отпичие от линейно зависят от концентрации лиганда [ А].

Следует отметить, что общую концентрацию рецепторов [.PJ0, которая входит как в уравнение (8), так и в уравнение (9), находят обычно из графика Скетчарда. Поэтому определение константы скорости ассоциации не вполне независимо от измерения Кд в условиях равновесия.

Определение менее сложно, так как является константой скорости реакции первого порядка. Если поддерживать условия опыта постоянными, равновесие сохраняется длительное время. Это равновесие динамическое: в единицу времени с рецепторами связывается столько же молекул меченого лиганда, сколько комплексов его с рецептором распадается. Чтобьі измерить скорость диссоциации комплекса, нужно создать условия, при которых илет только распад комплексов, а присоединения освобождающихся при этом молекул меченого пиганда к рецепторам не происходит. Иными словами, создаются условия, при которых реакция обратимого соединения меченого лиганда с рецептором (1) резко сдаинута влево, так что прямая реакция практически устранена. Это постигается либо разведением системы, пибо добавлением конкурентного (немеченого) пиганда в концентрации достаточно высокой, чтобы оккупировать по крайней мере 99% рецепторов при равновесии, Еспи исследуемая реакция представ пяет собой действительно простую реакцию первого порядка, оба метода должны дать одну и ту же величину k_i-
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 108 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама